槲皮素检测
一、核心检测方法
分光光度法
原理：利用槲皮素与铝离子等试剂反应生成有色络合物，通过测量特定波长（如370 nm）吸光度间接定量，检测限约为0.5–1 μg/mL。
步骤：样品经甲醇-水提取后，加入铝盐显色剂，避光反应后测定吸光度，需设置空白对照消除干扰。
特点：成本低、操作简便，但易受其他色素干扰，适用于快速筛查。
高效液相色谱法（HPLC）
原理：基于色谱柱分离与紫外检测（检测波长360 nm或370 nm），可精准定量槲皮素、山柰素等黄酮类化合物，定量限低至0.05 μg/mL13。
条件：常用C18色谱柱，流动相为甲醇-水（含磷酸调节pH），等度或梯度洗脱，流速1.0 mL/min。
优势：高灵敏度、高选择性，符合GB 2761等标准，适用于食品、药品质量控制。
液相色谱-质谱联用（LC-MS）
原理：结合HPLC分离与质谱检测，可同时分析槲皮素及其代谢产物，灵敏度达0.01 μg/kg，支持结构鉴定。
应用：适用于复杂基质（如血浆、尿液）中痕量槲皮素检测，需免疫亲和柱净化去除干扰物。
薄层色谱法（TLC）
原理：通过硅胶板分离，紫外灯下观察荧光斑点定性，检测限为1–5 μg/kg，操作简单但精度较低。
步骤：样品点样后以乙酸乙酯-甲酸-水展开，槲皮素斑点Rf值约0.5。
二、应用场景与技术适配
检测需求 推荐方法 技术优势
大批量样品快速筛查 分光光度法 成本低、检测时间≤30分钟
精准定量 HPLC法 符合国标，定量误差≤5%
代谢产物与结构分析 LC-MS法 提供分子结构信息，支持多组分同步检测
现场快速定性 TLC法 无需复杂设备，适用于基层实验室
三、质量控制要点
标准品与校准
使用纯度≥98%的槲皮素标准品配制梯度溶液（如10–100 μg/mL），验证线性关系（R²≥0.999）。
HPLC需定期校准紫外检测器波长（如360 nm）与流动相比例，避免基线漂移。
样品前处理
固体样品（如银杏叶）需粉碎过20目筛，乙醚脱脂后甲醇超声提取，膜过滤（0.45 μm）去除杂质。
液体样品（如酱油）需离心去悬浮物，避免堵塞色谱柱。
数据验证
加标回收率控制在80%–120%，RSD≤5%。
阳性对照需包含槲皮素、芦丁等干扰物，确保方法特异性。
四、技术发展趋势
多组分联检：开发同时检测槲皮素、山柰素、异鼠李素的HPLC方法，提升检测效率。
便携式设备：微型化HPLC与质谱设备支持田间现场检测，缩短样品流转周期。