菌丝检测

一、样本采集与处理

‌样本类型‌

‌体表组织‌：优先采集濒死鱼或典型病症鱼体表损伤部位（如鳃丝、皮肤溃烂处），需第一时间观察鳃丝颜色变化（如鲜红→暗红）‌。

‌鳃丝与内脏‌：鳃丝需完整剪取，内脏样本（如肝、肾）需无菌操作分离，避免污染‌。

‌前处理流程‌

‌清洗与固定‌：体表黏液用生理盐水冲洗，鳃丝样本可置于4%福尔马林溶液固定，防止菌丝自溶‌。

‌显微制片‌：取病变组织（如鳃丝末端肿胀处）压片或切片，甲醇脱脂后染色（如亚甲蓝）增强对比度‌。

二、显微镜观察与鉴别

‌菌丝形态特征‌

‌鳃霉菌‌：菌丝粗直（直径20-25 μm），分枝少，仅寄生于鳃小片组织，孢子直径约8 μm‌。

‌水霉菌‌：菌丝粗壮（直径15-30 μm），分枝少，可见黑色孢子囊，常附着污物形成絮状物‌。

‌丝囊霉菌‌：菌丝细长（直径6.6-15.6 μm），弯曲多且柔软，侵袭性强，可深入肌肉及骨骼‌。

‌鉴别诊断要点‌

‌特征‌          ‌   鳃霉菌‌                ‌        水霉菌‌              ‌     丝囊霉菌‌

‌菌丝直径‌    20-25 μm                  15-30 μm               6.6-15.6 μm

‌菌丝形态‌   粗直、分枝少           粗壮、黑色孢子囊       细长、弯曲多

‌感染部位‌    鳃小片组织             体表及浅层组织        肌肉深层及骨骼

‌典型症状‌ 鳃丝肿胀、颜色暗红     体表絮状物附着      肌肉溃烂、体表干净

‌镜检关键依据‌ 单极延伸菌丝      外菌丝黏附污物       无隔多核分枝菌丝

三、检测流程标准化

‌镜检操作规范‌

‌低倍镜（10×）筛查‌：观察菌丝分布密度及整体形态，定位可疑区域‌。

‌高倍镜（40×）确认‌：测量菌丝直径、观察分枝结构及孢子特征（如丝囊霉菌无隔多核）‌。

‌混合感染排查‌

结合纤毛虫检查（如斜管虫、车轮虫），鳃丝样本需同步观察寄生虫活动性‌。

细菌性继发感染需配合革兰氏染色（如发现革兰氏阴性杆菌）‌。

四、质量控制与注意事项

‌时效性要求‌

濒死鱼样本需在10秒内完成鳃丝颜色观察，避免症状失真‌。

低温期（14-23℃）样本需优先检测，水温升高易加速菌丝自溶‌。

‌误差控制‌

显微镜需定期校准目镜测微尺，确保菌丝直径测量精度（误差≤5%）‌。

阴性对照需使用健康鱼同部位组织，排除环境污染物干扰‌。

五、应用场景与技术适配

‌快速筛查‌：基层实验室可采用亚甲蓝染色压片法，30分钟内完成初步诊断‌。

‌精准鉴别‌：复杂感染病例需结合组织切片与分子检测（如PCR扩增真菌ITS序列）‌。